▶细胞样本裂解方案

🔬 贴壁细胞裂解方法

🧫 单层贴壁细胞总蛋白的提取：

1.  ①倒掉培养液🚰：
        将培养瓶中的培养液彻底倒掉。

2.  ②洗涤细胞🧼：

•      每瓶细胞加入 5ml 4℃预冷的PBS（0.01M pH7.2～7.3）。平放轻轻摇动 1分钟 洗涤细胞，弃去洗液。重复以上操作两次，共洗细胞三次以彻底去除培养液。将PBS弃净后，将培养瓶置于冰上。

3.  ③配制裂解液🧪：

•      按 1ml裂解液加10μl PMSF（100mM），摇匀置于冰上。（⚠️ 注意：PMSF需摇匀至无结晶时才可与裂解液混合。）

4.  ④细胞裂解🧊：

•      每瓶细胞加入 400μl 含PMSF的裂解液，于冰上裂解 30分钟。为使细胞充分裂解，培养瓶需经常来回摇动。

5.  ⑤收集细胞裂解物🧹：

•      用干净的刮棒将细胞刮于培养瓶的一侧（动作要快）。用移液枪将细胞碎片和裂解液移至 1.5ml离心管中。（❄️ 提示：整个操作尽量在冰上进行。）

6.  ⑥离心分离🌀：

•      于 4℃下12000rpm离心5分钟。（⚠️ 注意：提前开启离心机预冷。）

7.  ⑦保存样品🧊：

•      将离心后的上清分装转移至 0.5ml离心管中，放于 －20℃ 保存。

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🔬悬浮细胞裂解方法

1.  ①培养细胞🧫：
        培养 1×10⁶-1×10⁷个细胞。

2.  ②离心收集细胞🌀：

•      将细胞转移到 15ml圆形离心管中，4℃, 500g离心5分钟。

3.  ③洗涤细胞🧼：

•      小心去除上清，加入 5ml预冷PBS 重悬细胞。4℃, 500g离心5分钟。

4. ④ 去除上清🧹：

•      尽可能多地去除上清，小心不要碰到细胞沉淀。

5. ⑤ 加入裂解缓冲液🧪：

•      在细胞沉淀中加入 200μl ProcartaPlex Cell Lysis Buffer。

6. ⑥混匀与孵育🧊 ：

•      吹吸混匀 8-10次，冰上孵育 5分钟。

7.  ⑦转移至离心管🧫：

•      将所有细胞转移到 1.5ml离心管中。

8. ⑧离心分离🌀 ：

•      4℃, 14000g（离心机最大转速）离心10分钟。

9.  ⑨保存样品🧊：

•      将上清转移到新管中。该上清可立即用于检测或保存在 -80℃。

10.  ⑩检测样品🔍：

•      按照多因子检测试剂盒操作方法检测。样本孔加入 25μl细胞裂解液 和 25μl Universal Assay Buffer。

🔧 可选步骤：

•  蛋白定量检测📊
  建议细胞裂解后上清进行蛋白定量检测。推荐使用 蛋白定量检测。

• ZC-S0470BCA蛋白法含量检测试剂盒

• 将所有样本使用预冷的 ProcartaPlex Cell Lysis Buffer 调整样本蛋白浓度为 4-8 mg/ml。