Human ghrelin ELISA Kit（人饥饿素ELISA试剂盒）

▎  Ghrelin 概述

胃饥饿素(Ghrelin)，这个基因编码胃泌素释放肽-肥胖抑素前体蛋白，该蛋白可被裂解产生两种肽：胃泌素释放肽和肥胖抑素。胃泌素释放肽是一种强效的食欲刺激剂，在能量稳态中发挥重要作用。当胃为空时，其分泌开始，随后与下丘脑中的生长激素促分泌素受体结合，导致生长激素（促生长素）的分泌。据认为，胃泌素释放肽可调节多种活动，包括通过中脑边缘通路产生饥饿感和奖赏感知、胃酸分泌、胃肠道蠕动以及胰腺葡萄糖刺激的胰岛素分泌。最初有人提出，肥胖抑素通过促进饱腹感从而减少食物摄入，与胃泌素释放肽发挥相反的作用，但这一观点仍存在争议。最近的报告表明，肥胖抑素具有多种代谢作用，包括调节脂肪细胞功能和葡萄糖代谢。可变剪接会产生多种转录变体。此外，已确定该基因的反义转录本，并可能潜在地调节胃泌素释放肽-肥胖抑素前体蛋白的表达。

▎  别名

MTLRP

▎  用途

该试剂盒采用“一步”夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）体外定量检测血清、血浆、组织、细胞或其他相关生物液体中ghrelin 浓度。

▎  检测原理

将目标抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的目标连接于固相载体上的抗体结合，然后加入辣根过氧化物酶标记的抗体，将未结合的抗体洗净后再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（O.D.值），计算样品浓度。

▎  特异性

可检测样本中的ghrelin  , 且与其它类似物无明显交叉反应。

▎  重复性

板内，板间变异系数均<10%。

▎  标曲图

▎  批内差

取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测，每份样本连续测定20次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。

▎  批间差

选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本定量测定，每个样本使用同一试剂盒重复测定8次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值

▎  精密度

精密度用样品测定值的变异系数CV表示。CV（%）=SD/mean×100  CV<10% Inter-批间差: CV<13%

▎  稳定性

经测定，试剂盒在有效期内按推荐温度保存，其活性降低率小于5%。
为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响，实验室的环境条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。

▎  试剂盒的组成

▲未开封试剂盒，4℃保存；已开封，标准品-20℃保存，酶标板加干燥剂后密封-20℃保存，其他4℃保存。

▎  实验所需自备物品

1、450±10nm滤光片酶标仪（建议仪器使用前预热）  

2、高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL.   

3、Eppendorf 移液器.   

4、蒸馏水或去离子水.   

5、脱脂棉吸水纸.   

6、37℃恒温箱.  

7、100ml和1000ml量筒.

▎  ELISA操作视频