Rat VEGF ELISA Kit（大鼠血管内皮生长因子ELISA试剂盒）

▎  VEGF 概述

血管内皮细胞生长因子(VEGF)，该基因属于血小板源性生长因子（PDGF）/血管内皮生长因子（VEGF）生长因子家族的一员。它编码一种肝素结合蛋白，该蛋白以二硫键连接的同源二聚体形式存在。这种生长因子能诱导血管内皮细胞的增殖和迁移，对生理性和病理性血管生成都至关重要。小鼠中该基因的破坏会导致胚胎血管形成异常。在许多已知肿瘤中，该基因表达上调，其表达与肿瘤分期和进展相关。POEMS综合征（又称Crow-Fukase综合征）患者体内该蛋白水平升高。该基因的等位基因变异与1型糖尿病微血管并发症（MVCD1）和动脉粥样硬化有关。已发现编码不同异构体的可变剪接转录本变异体。也有证据表明，存在从上游非AUG（CUG）密码子开始的替代翻译起始，从而产生额外的异构体。最近的一项研究表明，通过使用一种通过终止密码子通读机制的替代框内翻译终止密码子，会产生一种C端延长的异构体，而且这种异构体具有抗血管生成作用。一些从AUG起始密码子衍生的异构体的表达受到一个小上游开放阅读框的调控，该阅读框位于内部核糖体进入位点内。在严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）感染期间，VEGF水平升高，从而促进炎症细胞的募集并增加血管紧张素转换酶2（ACE2）这一SARS-CoV-2结合靶标的两种产物之一的血管紧张素II（Ang II）的水平，进而促进炎症反应。反过来，Ang II又会促进VEGF水平升高，从而在炎症细胞因子的释放中形成一个恶性循环。

▎  别名

VPF; VEGFA; MVCD1; L-VEGF

▎  用途

该试剂盒采用“一步”夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）体外定量检测血清、血浆、组织、细胞或其他相关生物液体中VEGF浓度。

▎  检测原理

将目标抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的目标连接于固相载体上的抗体结合，然后加入辣根过氧化物酶标记的抗体，将未结合的抗体洗净后再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（O.D.值），计算样品浓度。

▎  特异性

可检测样本中的 VEGF  , 且与其它类似物无明显交叉反应。

▎  重复性

板内，板间变异系数均<10%。

▎  标曲图

▎  批内差

取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测，每份样本连续测定20次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。

▎  批间差

选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本定量测定，每个样本使用同一试剂盒重复测定8次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值

▎  精密度

精密度用样品测定值的变异系数CV表示。CV（%）=SD/mean×100  CV<10% Inter-批间差: CV<13%

▎  稳定性

经测定，试剂盒在有效期内按推荐温度保存，其活性降低率小于5%。
为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响，实验室的环境条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。

▎  试剂盒的组成

▲未开封试剂盒，4℃保存；已开封，标准品-20℃保存，酶标板加干燥剂后密封-20℃保存，其他4℃保存。

▎  实验所需自备物品

1、450±10nm滤光片酶标仪（建议仪器使用前预热）  

2、高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL.   

3、Eppendorf 移液器.   

4、蒸馏水或去离子水.   

5、脱脂棉吸水纸.   

6、37℃恒温箱.  

7、100ml和1000ml量筒.

▎  ELISA操作视频