线粒体通透性转换孔（MPTP）检测试剂盒

▎ 产品简介

线粒体通透性转换孔检测试剂盒（Mitochondrial Permeability Transition Pore Assay Kit）是一种采用 膜通透性的荧光探针 Calcein AM检测线粒体通透性转换孔开放程度的试剂盒。相比于基于线粒体膜电 位的方法更直接地检测到线粒体通透性转换孔开放程度的变化。由于 Calcein AM的毒性特别低，并且 不会抑制细胞的增殖、趋化性等绝大部分功能，所以与其它同类产品如CFDA SE等相比是更适合染活 细胞的荧光探针。

本试剂盒的检测原理如下，Calcein AM是一种可以对活细胞进行荧光染色的非极性染料，可通过被动运输进入细胞内并在细胞质组分包括线粒体等中积累。在细胞中，几乎没有荧光的Calcein AM被细胞内的酯酶水解去除乙酰甲酯，生成没有膜通透性的极性荧光染料钙黄绿素（Calcein or Fluorexon）， 从而使 Calcein滞留在细胞内，并使细胞质包括线粒体等呈现强绿色荧光。Calcein 本身是一种金属络合指示剂，在生理pH条件下和 Co2+、Ni2+、Cu2+、Fe3+和Mn2+等金属离子络合时，荧光信号会发生淬灭。

本试剂盒提供了 CoCl2用于淬灭细胞质中 Calcein的绿色荧光，但由于正常情况下线粒体的 MPTP是关闭的，此时 CoCl2不能进入线粒体，所以 Calcein AM染色后经 CoCl2处理会导致仅线粒体内呈现 Calcein的绿色荧光。作为对照，可将细胞用 Calcein AM染色并经过 CoCl2处理之后，用钙离子载体Ionomycin进一步处理以诱导细胞外的 Ca2+大量进入细胞内和线粒体基质并导致 MPTP的开放，或者用 适当的条件刺激细胞导致MPTP少量或大量开放，从而使部分 Calcein 释放进入细胞浆和钴离子结合而 失去荧光，同时细胞浆中的钴离子能进入线粒体内而导致其中的Calcein的绿色荧光部分甚至全部淬灭，最终导致线粒体中Calcein绿色荧光减弱或消失。这样根据线粒体中 Calcein 绿色荧光的强弱来判  断线粒体 MPTP 开放的程度，绿色荧光越强，开放程度越低，绿色荧光越弱，开放程度越高。如果用于流式细胞仪，每个样品的检测体系体积为1ml时，可以进行100次检测；96 孔板每孔检 测体系的体积为100μl时可以检测1000次。

▎  注意事项

1 ．荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光， 以减缓荧光淬灭。

2 ．Calcein AM (1000X)须尽量避免反复冻融。如果多次使用，请注意适当分装。

3 ．CoCl2 有腐蚀性，对人体有害或有刺激性，对人体有呼吸道、生殖等特定器官毒性，或致畸致 癌毒性，操作时请小心，并确保有效防护以避免直接接触人体或吸入体内，并须注意避免腐蚀其它物 品。

4 ．CoCl2 对水生生物有毒或有害，禁止直接排入环境。

5 ．本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得 存放于普通住宅内。

6 ．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件：-20ºC 保存，一年有效。Calcein AM (1000X)和 Ionomycin (200X)需要避光保存。