ELISA常见问题

▶血清血浆样本该选用哪种真空采血管收集?

2022-02-24

一、采血管选择标准

样本类型

‌适用采血管

管盖颜色

关键特性

血清

不含抗凝剂采血管
(或含促凝剂采血管)

红色、黄色、橘色

促凝剂加速血块形成,静置30-60分钟后离心分离血清。

血浆

含抗凝剂采血管(肝素、EDTA、柠檬酸盐等)

绿色、紫色

抗凝剂防止血液凝固,需立即轻柔颠倒混匀8-10次,离心后取上清血浆。

二、样本保存与冻存要求

⚠️短期保存(1周内检测)

· ‌储存条件‌:2-8℃冷藏,避免剧烈温度波动。

· ‌注意事项‌:血清/血浆需离心后分装至无菌EP管,密封防蒸发。

⚠️ ‌长期冻存(超1周检测)

冻存温度

最长保存时间

操作要求

-20℃

1个月

分装至单次用量(如100μL/管),标注日期,避免反复冻融。

-80℃

3个月

使用冻存管或耐低温EP管,液氮气相保存效果更佳(避免直接接触液氮)。

三、冻存样本复温与检测流程

1.解冻步骤‌:

从-80℃/-20℃转移至4℃冰箱,缓慢解冻(推荐过夜).

禁止‌:室温快速解冻或水浴加热(易导致蛋白变性或细胞碎片增加)。

2.离心处理‌:

解冻后样本需3000×g离心10分钟(4℃),去除沉淀物或纤维蛋白凝块。

取上清液进行检测,避免吸到管底颗粒物。

3.检测前验证‌:

检查样本是否溶血、脂血或浑浊(可能干扰光学检测)。

若发现异常,需重新采集或注明状态(部分检测需修正数据)。

四、注意事项

⚠️ ‌抗凝剂干扰

· EDTA可能螯合金属离子,影响部分酶学检测(如ALP、淀粉酶)。

· 肝素可能干扰PCR扩增,需根据检测项目选择合适抗凝剂。

⚠️ ‌反复冻融

· 反复冻融>3次可能导致蛋白降解或生物活性丧失,需严格分装。

⚠️ ‌特殊检测要求

· 凝血功能检测需柠檬酸钠抗凝血(蓝盖管);血糖检测建议用氟化钠/草酸钾抗凝管(灰盖管)。

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